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ELISA直接法測長葉車前花葉病毒（RMV）含量實(shí)驗(yàn)步驟

1. 將不同濃度的待檢測RMV溶液作為樣品液，在測定板每孔各加250ul,至冰箱（4℃）中孵育過一夜。
2. 孵育后，去除孔穴內(nèi)抗原溶液，用PBS-Tween20溶液緩緩沖洗孔穴3次，每次3min，然后去凈洗滌液。
3. 每孔穴加250ulRMV的酶標(biāo)記抗體溶液（用1%牛血清白蛋白的PBS- ween20稀釋）在恒溫箱（37℃）里孵育3-6h,或6℃下過一夜。
4. 去除孔穴酶標(biāo)記抗體溶液，用PBS-Tween20溶液緩緩沖洗3次每次3min，然后去凈洗滌液。
5. 每孔穴加入新鮮配備的底物溶液250ul,室溫放置0.5h，或者放置出現(xiàn)黃色。
6. 加入50ul3N NaOH，終止反應(yīng)。
7. 對(duì)每孔穴的黃色溶液，測定449nm波長處的吸光值。

討論

1. 如該聚苯乙烯塑料微量反應(yīng)板*次使用，應(yīng)分別用標(biāo)準(zhǔn)濃度的RMV溶液、RMV的抗血清及RMV與它的IgG形成的免疫結(jié)合物，進(jìn)行期盼滴定法來測該聚苯乙烯塑料微量反應(yīng)板對(duì)RMV抗原和它的抗體的吸附能力。
2. 在正式測樣品前，用0.1mol/L pH9.6碳酸鹽緩沖液配置各種標(biāo)準(zhǔn)濃度的RMV溶液，依照實(shí)驗(yàn)步驟測定RMV各種標(biāo)準(zhǔn)濃度的A449nm值，以病毒標(biāo)準(zhǔn)濃度為橫坐標(biāo)，A449nm值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，由此可以測出RMV包被的濃度。
3. 測出原始底物的吸光值，以便核準(zhǔn)數(shù)據(jù)。
4. 對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線，就可算出樣品液中RMV的含量。
5. 如無牛血清白蛋白，可用0.1%白明膠代替。
6. 對(duì)于不穩(wěn)定的病毒，用中性緩沖液稀釋。
7. 如有ELISA測定儀，可快速測定。
8. 腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)ELISAKit
   人白細(xì)胞活化黏附因子(ALCAM)ELISAKit
   人活化素A(ACV-A)ELISAKit
   人神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白1(NRG-1)ELISAKit
   人心鈉肽(ANP)ELISA Kit
   人多巴胺D2受體(D2R)ELISA Kit
   人內(nèi)嗎啡肽-2(EM-2)ELISAKit
   人α-內(nèi)嗎啡肽(α-EP)ELISAKit
   人抑制素(INH)ELISA Kit
   人神經(jīng)元凋亡抑制蛋白(NAIP)ELISA Kit
   人食欲素/阿立新B(OX-B)ELISAKit
   人促睡眠肽(DSIP)ELISAKit
   人6-羥多巴胺(6-OHDA)ELISAKit
   人心納素(ANF)ELISAKit
   人神經(jīng)髓鞘蛋白(p2)ELISAKit
   人精氨酸加壓素(AVP)ELISA Kit
   人垂體腺苷酸環(huán)化酶激活肽(PACAP)ELISAKit
   人微管相關(guān)蛋白2(MAP-2)ELISAKit
   人神經(jīng)絲蛋白(NF)ELISA Kit
   人利鉀尿肽(KP)ELISA Kit
   人神經(jīng)降壓素(NT)ELISAKit
   人神經(jīng)激肽B(NKB)ELISAvKit